拼音名：Shanghan Vi Duotang Yimiao
英文名：Vi PoIvsaccharide Typhoid Vaccine
书页号：2005年版三部- 28
本品系用伤寒沙门菌培养液纯化的Vi多糖。经用PBS稀释制成。用于预防伤寒。
1基本要求
生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
2制造
2.1 菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.1 菌种名称
生产用菌种为伤寒沙门菌Ty2株。
2.1.2 种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
2.1.3 种子批菌种的传代
主种子批启开后传代次数不得超过5代。工作种子批启开后至接种发酵罐培养传代次数不得超过5代。
2.1.4 种子批菌种的检定
2.1.4.1 培养特性及染色镜检
菌种接种于pH7.2～7.4的肉汤琼脂、马丁琼脂或其他适宜的培养基35～37℃培养16～20小时，应为无色半透明、边缘整齐、表面光滑湿润的圆形菌落。染色镜检应为革兰阴性杆菌。
2.1.4.2 生化特性
发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇(产酸不产气)；不发酵乳糖、蔗糖(附录ⅪV)；氧化酶试验阴性。
2.1.4.3 血清学特性
(1)玻片凝集试验
菌种的新鲜培养物与Vi及H-d参考血清有强凝集反应(+++以上)，与0-9参考血清不产生凝集或仅有较弱凝集反直。
(2)定量凝集试验
菌种的新鲜培养物，用PBS制成6.0×10〈8/ml的菌悬液，加入终浓度为0.5%的甲醛溶液，杀菌后的菌液(或直接用活菌菌液)，与伤寒Vi参考血清做定量凝集试验；另取经100℃ 30分钟加热杀菌的菌液，与伤寒0参考血清做定量凝集试验。出现(+)凝集之血清最高稀释度为凝集反应效价，凝集效价应不低于血清原效价之半。
2.1.5 种子批的保存
原始种子批和主种子批应冻干保存于2～8℃；工作种子批可接种于适宜培养基，保存于2～8℃。
2.2 原液
2.2.1 生产用种子
启开上作种子批菌种，检定合格后。接种于改良半综合培养基或其他适宜培养基，制备数量适宜的生产用种子。
2.2.2 生产用培养基
采用改良半综合培养基或经批准的其他培养基。培养基不应含有与十六烷基三甲基溴化铵能形成沉淀的成分。
2.2.3 培养
采用培养罐液体培养。在培养过程中及杀菌前取样进行菌液浓度测定及纯菌试验。涂片做革兰染色镜检，如发现污染杂菌，应废弃。
2.2.4 杀菌
培养物于对数生长期的后期或静止期的前期收获。加入甲醛溶液杀菌，其最终浓度为O．5%～2.0%，以确保杀菌完全又不损伤其多糖抗原为宜。
2.2.5 纯化
2.2.5.1 去核酸
将已杀菌的培养液(单批或多批混合)离心后收集上清液，加入十六烷基三甲基溴化铵，充分混匀，形成沉淀；离心后的沉淀物用注射用水溶解，并加入适量lmol/L氯化钠(或2mol／L氯化钙)溶液，摇动或搅拌1小时，使多糖与十六烷基三甲溴化铵解离；加入乙醇至最终浓度为25%，2～8℃静置1～3小时或过夜，离心收集澄清的上清液。
2.2.5.2沉淀多糖
于上述上清液中加入冷却乙醇至最终浓度为80%，充分振摇使多糖沉淀，离心收集沉淀；沉淀物用无水乙醇及丙酮各洗2次以上，干燥后即为多糖粗制品。多糖粗制品应保存在－20℃以下，待纯化。
2.2.5.3 多糖纯化
将多糖粗制品溶解于1/10饱和中性醋酸钠溶液中，使其浓度达5～20mg/ml；按1：2容量川冷酚(100g结晶酚溶于40ml的1/10饱和醋酸钠溶液)提取数次．离心收集上清液，并用0.1mol/L氯化钙溶液或其他适宜溶液透析(必要时或有条件时也可用其他方法太除内毒素)；加入乙醇至最终浓度为75%～80%，离心收集的沉淀物用无水乙醇及丙酮各洗2次以上，干燥后用灭菌注射用水溶解，即为精制多糖原液。提取过程应尽可能在15℃以下进行。
2.2.6 原液榆定
纯化多糖原液除菌过滤后，取样按3.1项进行。
2.2.7 保存及有效期
原液应保于于－20℃或以下，自多糖粗制品制造之口起有效期为5年。
2.3 半成品
2.3.1 配制
半成品可由单批或多批多糖原液合并后，用无菌无热原PBS(pH6.5～7.5)稀释，可加入适量防腐刹。每1次人用剂量含多糖应不低于30μg。
2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.4.3 规格
每瓶5ml(10次人用剂量)、1ml(2次人用剂量)、O.5ml(1次人用剂量)；每1次人用剂量O.5ml，含伤寒Vi多糖应不低于30μg。
2.4.4 包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 鉴别试验
采用免疫双扩散法(附录Ⅷc)，Vi多糖与伤寒Vi血清48小时内应形成明显沉淀线，而与伤寒O血清不形成沉淀线。
3.1.2 化学检定
3.1.2.1 固体总量
依法测定(附录ⅦM)。
3.1.2.2 蛋白质含量
应小于10mg/g(附录ⅥB第二法)。
3.1.2.3 核酸含量
应小于20mg/g，核酸在波长260nm处的吸收系数(E1% 1cm)为200(附录ⅡA)。
3.1.2.4 O-乙酰基含量
应不低于2mmol/g(附录ⅥF)。
3.1.2.5多糖分子大小测定
多糖分子的K〈［D］〉值在0.25以前的洗脱液多糖回收率应在50%以上(附录ⅧH)。
3.1.3 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.2 半成品检定
3.2.1 多糖含量
称取O.6g琼脂糖，加入O.05mol/L巴比妥缓冲液(pH8.6)40ml中，加热溶胀完全，待冷却至约56℃时，加人伤寒vi血清1ml，混匀后迅速倾倒丁12cm×6cm的洁净水平玻板上，待凝胶凝固后用直径3mm的打孔器在距底边1.5cm处打孔。各孔中分别加入各稀释好的伤寒vi抗原标准品溶液(浓度分别为：100μg/m1、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/m1、6.25μg/ml)和本品5μl(本品做双孔)。靠近边缘一孔中可加入10μl溴酚蓝指示液。加样后将玻板置于电泳槽上，滤纸搭桥，加样端与电泳仪负极相连。采用0.05mol/L巴比妥缓冲液(pH8.6)为电极缓冲液，8V/cm恒压电泳至指示剂迁移到前沿。取下玻板浸泡于生理氯化钠溶液1～2小时后，覆盖洁净滤纸移至培养箱中过夜烤干。用考马斯亮蓝染色液染色至火箭峰出现，用甲醇-乙酸溶液脱色至背景清晰。准确测量火箭峰高，以标准品浓度的对数和相应的峰高作直线回归，得直线回归方程，将本品的峰高均值代入直线回归方程，求出本品浓度。
3.2.2 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.3 成品检定
3.3.1 鉴别试验
按3.1.1项进行。
3.3.2 外观
应为无色澄明液体，无异物。
3.3.3 化学检定
3.3.3.1 pH值
应为6.5～7.5(附录V A)。
3.3.3.2 防腐剂含量
如加苯酚做防腐剂，其含量应不高于3.Og/L(附录ⅥM)。
3.3.3.3 多糖含量
按3.2.1项进行，每人用剂量多糖含量应不低于30μg。
3.3.4 无菌检查
依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。
3.3.5 异常毒性检查
依法检查(附录ⅫF)，应符合规定。
3.3.6 热原检查
依法检查(附录ⅫD)，注射剂量按家兔体重每1kg注射0.025μg多糖。
4 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输，自分装之日起有效期为2年。
5 使用说明
伤寒Vi多糖疫苗使用说明
【药品名称】
通用名称：伤寒Vi多糖疫苗
英文名称：Vi Polysaccharide Typhoid Vaccine
汉语拼音：Shonghan Vi Duotong Yimiao
【成分和性状】本品系用伤寒沙门菌培养液纯化的Vi多糖，经用PBS稀释制成，为无色澄明液体。
【接种对象】主要用于部队、港口、铁路沿线的工作人员，下水道、粪便、垃圾处理人员，饮食业、医务防疫人员及水上居民或有本病流行地区的人群。
【作用与用途】接种本疫苗后，可使机体产生体液免疫应答。用于预防伤寒。
【规格】每瓶5ml(10次人用剂量)、]ml(2次人用剂量)、0.5ml(1次人用剂量)；每1次人用剂量0.5ml，含伤寒vi多糖应不低于30/μg。
【用法用量】(1)上臂外侧三角肌肌内注射。
(2)注射1针，剂量为0.5ml。
【不良反应】反应轻微，偶有个别短暂低烧，局部稍有压痛感，可自行缓解。
【禁忌】(1)发热，患严重心脏病、高血压、肝脏疾病、肾脏疾病及活动性结核者。
(2)妊娠期、月经期及哺乳期妇女。
(3)有过敏史者。
【注意事项】(1)疫苗有异物或疫苗瓶有裂纹者，均不得使用。
(2)严禁冻结。
【贮藏】于2～8℃避光保存和运输。
【包装】
【有效期】2年。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
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